Содержание клеток крови является важным диагностическим критерием. В настоящее время для подсчёта форменных элементов используются автоматические гемоанализаторы. Однако раньше (в некоторых лабораториях и до сих пор) определение количества клеток в образце исследуемой крови выполнялось с помощью счётной камеры Горяева.
Камера Горяева представляет собой предметное стекло, на поверхности которого имеются четыре поперечных жёлоба. Два средних жёлоба соединяются между собой продольным, образуя фигуру в виде буквы «Н». Между желобами расположены три узкие пластинки, причём поверхность средней пластинки на 0,1 мм ниже, чем боковых. Продольный жёлоб разделяет среднюю пластинку на две. По обе стороны от продольного жёлоба гравировкой нанесена микроскопическая сетка Горяева, которая образована десятью рядами линий (по пять параллельных линий в каждом ряду). Пять рядов расположены в поперечном направлении, пять – в продольном. На пересечении рядов формируются большие квадраты, каждый из которых состоит из 16 малых (4×4 квадрата). Всего больших квадратов 25 (5×5 рядов). Сетка нанесена с большой точностью – сторона каждого малого квадрата равна 1/20 мм, а его площадь – 1/400 мм2 (1/20×1/20).
Подсчёт форменных элементов с помощью камеры Горяева выполняется следующим образом. Сначала исследуемую кровь разводят, при этом получается суспензия (взвесь) форменных элементов. К камере плотно притирают покровное стекло, после чего под него заливают суспензию, так чтобы она равномерно заполнила пространство между покровным стеклом и сеткой. Затем под микроскопом подсчитывают клетки крови в определённом количестве квадратов.
На основе этих данных можно вычислить число форменных элементов в 1 мм3, поскольку объём жидкости над каждым малым квадратом известен – 1/4000 мм3 (1/20×1/20×1/10).
Методики подсчёта эритроцитов и лейкоцитов несколько различаются.
Подсчёт эритроцитов. Образец исследуемой крови объёмом 0,02 мл разводят в 4 мл 3% раствора хлорида натрия (разведение в 200 раз). Поскольку этот раствор гипертоничен (его осмолярность выше, чем плазмы крови), он вызывает выход воды из эритроцитов. Как следствие, клетки сморщиваются, и их лучше видно под микроскопом.
Приготовленную суспензию заливают в камеру Горяева и проводят подсчёт клеток в 5 больших квадратах (80 маленьких). Полученное количество эритроцитов подставляют в формулу:
где
Х – количество эритроцитов в 1 мм3;
200 – разведение крови;
80 – количество маленьких квадратов, в которых выполняют подсчёт;
1/4000 – объем жидкости над каждым малым квадратом сетки Горяева.
Чтобы рассчитать количество эритроцитов в одном литре Х умножают на 106 (в одном литре миллион кубических миллиметров).
Подсчёт лейкоцитов. Двадцать микролитров исследуемой крови (0,02 мл) разводят в 0,4 мл 5% раствора уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Кислота разрушает эритроциты (чтобы не мешали подсчёту), метиленовая синь подкрашивает ядра лейкоцитов.
Полученную суспензию заливают в камеру и проводят подсчёт клеток в 25 больших квадратах (400 маленьких), после чего получившееся значение подставляют в формулу:
где
Х – количество лейкоцитов в 1 мм3;
В – число лейкоцитов в 400 маленьких (25 больших) квадратах;
400 – количество малых квадратиков, в которых производят подсчет;
1/4000 – объем жидкости над каждым малым квадратом сетки Горяева.
Как и с эритроцитами, чтобы вычислить количество лейкоцитов в одном литре, Х умножают на 106.
 |
 |